A Maryland Egyetem Orvostudományi Karának Vakcinafejlesztési és Globális Egészségügyi Központjában (Baltimore, MD, USA) végzett klinikai vizsgálat célja az rH5-NE intranazális influenza vakcina biztonságosságának és immunogenitásának értékelése volt egészséges felnőtt önkénteseken. A tanulmány részletesen feltárta a vakcina helyi és szisztémás immunválaszait, valamint a későbbi intramuszkuláris booster adag hatását.
Vizsgálati alanyok és beválasztási kritériumok
A kutatásban 18–45 év közötti, egészséges, nem terhes és nem szoptató felnőtteket vontak be. A résztvevőket a klinikai központ önkéntes adatbázisából és a Baltimore/Washington DC régióban megjelent hirdetések útján toborozták. A beválasztás feltételei között szerepelt a negatív terhességi teszt (alkalmazható esetekben), laboratóriumi szűrővizsgálatok, kórelőzmény és fizikai vizsgálat az első oltást megelőző 28 napon belül. Krónikus betegséggel vagy olyan gyógyszerekkel kezelt személyeket kizártak, amelyek befolyásolhatták a biztonságosságot vagy a vizsgálati eredményeket.
Vizsgálati csoportok és oltási protokoll
A résztvevőket öt csoportba randomizálták:
- Három csoport rH5-NE-t kapott különböző antigén dózisokkal (25, 50 és 100 µg).
- Egy csoport unadjuvált rH5-t (100 µg) kapott.
- Egy csoport placebót (formulációs puffert) kapott.
A vakcináció lépcsőzetesen, dózisnövelő eljárással történt négy oltási kohorszban. Minden rH5-NE dózist két sentinel résztvevőn teszteltek, mielőtt további adagokat adtak volna be.
Az intranazális oltások az 1. és 29. napon történtek. A 197. napon minden résztvevő heterológ intramuszkuláris booster oltást kapott egy engedélyezett, inaktivált H5N1 IIV 90 µg-os adagjával.
Vizsgálati célkitűzések
Elsődleges célkitűzés
Az rH5-NE vakcina biztonságosságának és reakciókészségének értékelése.
Másodlagos célkitűzések
- Mukozális immunválaszok (IgA, IgG, T-sejt mediált immunitás) értékelése két adag rH5-NE után.
- Humorális immunválaszok (szérum HAI) mérése.
- Az intramuszkuláris H5N1 IIV booster egyetlen adagjának biztonsága és reakciókészsége.
Előre meghatározott exploratív célok
- Humorális immunválaszok elemzése több időpontban mindkét vakcinára specifikus antigénekre.
- Primer T-sejt mediált immunválasz perifériás vérben mindkét vakcinára specifikus antigénekre.
- Emlékező B-sejt válaszok mérése ELISpot módszerrel perifériás vérből.
Klinikai vizsgálati protokoll módosítása
2024. május 29-én a protokollt módosították: korábban az rH5-NE biztonsága és mukozális immunogenitása egyaránt elsődleges cél volt. Az amerikai mezőgazdasági ágazatban terjedő madárinfluenza A/H5N1 (clade 2.3.4.4b) miatt a kutatócsoport, a finanszírozóval, szponzorral és az etikai bizottsággal egyeztetve úgy döntött, hogy felgyorsítják az elemzéseket, így a mukozális immunogenitás másodlagos céllá vált.
A vizsgált vakcinák összetétele
rH5-NE vakcina:
- rH5 glikoprotein antigén: rekombináns hemagglutinin (HA), amelyet Nicotiana benthamiana dohánynövényben állítottak elő (A/Indonesia/05/2005 H5N1 clade 2.1), tartalmaz polihisztidin címkét a tisztítás hatékonyságához és endoplazmatikus retikulum visszatartó jelet (KDEL) a hatékony fehérjekifejezéshez.
- W805EC nanoemulziós adjuváns: 60%-os nanoemulzió vízben olaj formában (~400 nm részecskeméret), amelyet GMP körülmények között állítottak elő cetilpiridinium-klorid, Tween-80, etanol és finomított szójaolaj felhasználásával.
- Saját formulációs puffer: amely biztosítja az optimális stabilitást és beadást.
A végleges vakcina 20% W805EC nanoemulziót tartalmazott az adott adag rH5 antigénnel keverve. Kontrollcsoportok unadjuvált rH5-t vagy csak formulációs puffert kaptak intranazálisan. Az intranazális sorozat után minden csoport megkapta a Sanofi által gyártott engedélyezett H5N1 inaktivált influenza vírus elleni intramuszkuláris oltást (90 µg HA/adag).
Klinikai eljárások
A résztvevők írásos beleegyezését követően végezték el az adatgyűjtést és az oltásokat. Az intranazális oltásokhoz elektronikus pipettát használtak, amely tíz egymást követő 25 µL cseppet juttatott mindkét orrüreg alsó turbinalis részére (összesen 500 µL). Az intramuszkuláris booster adagot a deltoid izomba adták be gyártói előírás szerint.
Minden oltást követően megfigyelés történt: intranazális oltások után 60 percig, intramuszkuláris után 30 percig. Azonnali reakciókat értékelték, majd elektronikus tünetnapló használatára oktatták a résztvevőket.
A beoltást követően telefonos kapcsolattartás történt három nappal később az esetleges mellékhatások felmérésére, valamint személyes kontrollvizitek zajlottak a 8., 43., illetve 204. napon laboratóriumi vizsgálatokkal kiegészítve.
Biztonsági monitorozás
A helyi és szisztémás reakciókat minden oltást követően legalább hét napig figyelték:
- Intranazális oltások esetén: szemirritációk (pl. könnyezés, viszketés), orrpanaszok (pl. tüsszentés, orrfolyás), légúti tünetek (pl. köhögés), valamint általános tünetek (pl. láz, fejfájás).
- Intramuszkuláris oltások esetén: helyi fájdalom, duzzanat, bőrpír; szisztémás tünetek közé tartozik hányinger, fejfájás vagy izomfájdalom.
Ezen túlmenően nem várt mellékhatásokat is dokumentáltak 28 napig minden oltást követően; súlyos eseményeket pedig akár egy évig követtek nyomon.
Immunológiai vizsgálatok
Mukozális immunválaszok
Mérték az orrnyálkahártya IgA és IgG antitest szintjeit ELISA módszerrel specifikus H5 antigénekre vonatkozóan.
Humorális immunválaszok
- Hemagglutináció-gátlási teszt (HAI): A/Vietnam/1203/2004 (clade 1) és A/Indonesia/05/2005 (clade 2.1) törzsek ellen mérve több időpontban.
- ELISA: Specifikus IgG és IgA antitestek mérése különböző H5 antigénekre (beleértve a fej nélküli H5 stalk domént).
- Mikroneutralizációs teszt (MN): Vírusneutralizáló antitestek mérése több H5N1 törzs ellen post hoc elemzésként.
- Surface Plasmon Resonance (SPR): Antitest kötődési affinitás elemzése két H5N1 törzs rekombináns HA fehérjéjére.
- Antitest-függő sejtes citotoxicitási teszt (ADCC): Az antitestek funkcionális aktivitását mérte speciális Jurkat sejtvonal segítségével.
Sejtes immunválaszok
T-sejt aktivációs markerek (CD69, CD137 stb.), citokin termelés és degranulációs markerek mérése CD4+ és CD8+ memória T-sejt populációkban flow-citometria segítségével különböző időpontokban mindkét vakcinára specifikus antigének stimulálása után.
Emlékező B-sejt válaszok ELISpot módszerrel
Kryoprezervált perifériás vér mononukleáris sejteket poliklonálisan aktiváltak majd specifikus emlékező B-sejteket számláltak rekombináns rH5 antigénnel bevont lemezeken.
Eredmények – Immunogenitási interim elemzés
A hemagglutináció-gátlási adatok előzetes elemzését követően összesített adatokat szolgáltattak a kutatócsoportnak és finanszírozóknak vakcinacsoportonként időpontokra bontva. Az eredmények alapján megállapítható volt az rH5-NE dózisfüggő immunválasza valamint az intramuszkuláris booster jelentősége a humorális válasz erősítésében.
Statisztikai elemzés
A fázis I-es vizsgálat nem tartalmazott előre meghatározott hipotézisvizsgálatokat; a mintaméret összhangban volt FDA irányelvekkel. Biztonsági adatokat minden beoltott résztvevő esetében elemezték súlyosság szerint; immunológiai eredményeket geometriai átlaggal, szerokonverziós arányokkal jellemezték különböző időpontokon. Kétoldalú statisztikai teszteket alkalmaztak csoportközi összevetésekhez Stata SE18 szoftverrel.
Szakmai etika és szabályozói háttér
A protokollt az University of Maryland Intézményi Etikai Bizottsága hagyta jóvá (HP-00086502). A vizsgálat regisztrálva van ClinicalTrials.gov oldalon NCT05397119 azonosító alatt. A teljes protokoll nyilvánosan elérhető kiegészítő információként is rendelkezésre áll.
Támogatók szerepe
A BlueWillow Biologics képviselői hozzájárultak a tanulmány tervezéséhez és eredményeinek értelmezéséhez; NIAID és BARDA pénzügyi támogatást nyújtottak illetve vakcinaantigént biztosítottak, de nem vettek részt a tanulmány kivitelezésében vagy publikációjában. A vezető kutató teljes felelősséget vállalt az adatok integritásáért és publikálási döntésekért.